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技術(shù)文章
色譜柱老化時(shí)間沒有固定標(biāo)準(zhǔn),需根據(jù)色譜柱類型、新柱 / 舊柱狀態(tài)、固定相特性及目標(biāo)分析需求綜合判斷,核心原則是 “充分去除雜質(zhì)且不損傷固定相",常見場(chǎng)景的時(shí)間范圍及影響因素如下:
不同色譜柱的固定相穩(wěn)定性、出廠殘留(如溶劑、低分子聚合物)差異較大,老化時(shí)間差異顯著,以下為最常見的兩類色譜柱參考:
老化時(shí)間并非越長越好(過度老化可能導(dǎo)致固定相流失、柱效下降),需結(jié)合以下因素調(diào)整:
新柱:出廠時(shí)可能殘留合成溶劑(如二氯甲烷、甲苯)或保護(hù)劑,需充分老化(尤其是 GC 柱),避免殘留雜質(zhì)干擾后續(xù)分析;若新柱直接用于高靈敏度檢測(cè)(如痕量分析),需額外延長 0.5~1 小時(shí)。
舊柱:若僅短期閑置(1~2 周),老化 0.5 小時(shí)即可;若因樣品殘留導(dǎo)致柱效下降(如峰展寬、拖尾),需用強(qiáng)溶劑(如 GC 用高沸點(diǎn)溶劑、HPLC 用純乙腈)沖洗 1~2 小時(shí),再恢復(fù)至分析條件平衡。
GC 柱:若載氣(氮?dú)狻⒑猓┘兌鹊停ㄈ绾鯕狻⑺郑瑫?huì)加速固定相氧化,需降低老化溫度、延長時(shí)間(如從 2 小時(shí)增至 3 小時(shí)),同時(shí)確保載氣經(jīng)過脫水、脫氧凈化;
HPLC 柱:流動(dòng)相若含緩沖鹽(如磷酸鹽),需先用水相沖洗(去除鹽殘留),再用有機(jī)相平衡,避免鹽結(jié)晶堵塞柱床,此時(shí)老化時(shí)間需增加 0.5 小時(shí)。
無需嚴(yán)格卡時(shí)間,可通過以下指標(biāo)確認(rèn)老化充分,避免過度老化:
GC 柱:
HPLC 柱:
優(yōu)先參考說明書:不同廠商(如默克)的色譜柱會(huì)標(biāo)注推薦老化條件(溫度、時(shí)間),需以說明書為首要依據(jù);
靈活調(diào)整:新柱、強(qiáng)極性柱、痕量分析需延長時(shí)間(1~4 小時(shí));舊柱、弱極性柱、常規(guī)分析可縮短(0.5~2 小時(shí));
避免過度:GC 柱老化溫度不超過固定相最高使用溫度的 90%,HPLC 柱避免長時(shí)間用純有機(jī)相沖洗(可能導(dǎo)致固定相塌陷)。